Equipements
Le Gallios est équipé de 3 LASER à alignement fixe, séparés spatialement. Le banc optique de type boulevard permet une transmission de la fluorescence proche de 100% avec ses filtres de réflexion positionnés à 18°. Il permet de mesurer jusqu’à 10 paramètres de fluorescence. La cellule d’écoulement en quartz est couplée au moyen d’un gel à des lentilles de collection d’ouverture numérique de 1,2. Il est possible d’adapter l’angle de collection de la lumière diffractée à la taille des éléments analysés grâce à 2 photodiodes indépendantes. Il est ainsi possible de distinguer entre elles des particules submicrométriques (0,4 er 0,5 µm). L’enregistrement des données sur 20 bits permet des compensations de haute précision. Le passeur de tube de type carrousel permet d’analyser automatiquement jusqu’à 32 tubes. Avant chaque analyse l’échantillon est remis en suspension au moyen d’un vortex incorporé. La vitesse d’acquisition maximale est de 25 000 évènements par seconde et jusqu’à 24.106 évènements stockés par fichier (ce chiffre varie en fonction du nombre de paramètres sauvegardés).
Le pilotage de la station et l’acquisition des données sont réalisés avec le Kaluza.Gallios.pdf.
Télécharger le logiciel Kaluza G afin de préparer en déporter depuis votre ordinateur de laboratoire les masques de protocoles et les worklists. Attention ne fonctionne que sur PC ou Mac avec gestion Windows.
ATTENTION. Les analyses sur le Gallios se font uniquement en tubes de 5 ml vendus par Beckman Coulter : 2523749.
| LASER | PMT | Dichroïc | Filtre | Désignation standard |
Fluorochrome commun Liste non exhaustive |
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| 488 nm | Filtre 1 | 550 dSP | 525 / 40 BP | 505 - 545 | FITC | Alexa 488, GFP, YFP, Zombie Green, JC-1 (monomere), Sytox Green, TO-PRO-1 |
| 22 mW | Filtre 2 | 595 dSP | 575 / 30 BP | 560 - 590 | PE | PE, DiOC, DyeCycle Orange, SNARF |
| Filtre 3 | 655 dSP | 620 / 30 BP | 605 - 635 | PE-Texas Red | PE-Texas Red, PI, DiOC | |
| Filtre 4 | 730 dSP | 695 / 30 BP | 680 - 710 | PE - Cy5.5 | PE-Cy5.5, PerCP-Cy5.5, Alexa 700, Tri-Color, 7-AAD, |
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| Filtre 5 | 755 LP | PE - Cy7 | Alexa 750 | |||
| 638 nm | Filtre 6 | 710 dSP | 660 / 20 BP | 650 - 670 | APC | Alexa 647, Cy5, TO-PRO-3, Sytox Red |
| 25 mW | Filtre 7 | 750 dSP | 725 / 20 BP | 715 - 735 | Alexa 700 | Alexa 700 |
| Filtre 8 | 755 LP | 755 LP | APC - Cy7, | APC-Alexa 750, APC-H7 | ||
| 405 nm | Filtre 9 | 480 dSP | 450 / 40 BP | 430 - 470 | Pacific Blue | Alexa 405, PO-PRO-1, DyeCycle Violet |
| 40 mW | Filtre 10 | 550 / 40 BP | 530 - 570 | SYTOX blue | AmCyan |
d : Dichroïque – LP : Long Pass – SP : Short Pass - BP : Band Pass
Le MoFlo Astrios EQ est un trieur haut de gamme ultra-rapide. Il est équipé de 5 LASER fibrés (hormis le LASER U.V.) et décalés spatialement. Les émissions de fluorescences sont collectées par des fibres optiques placées en sortie de pinhole. La configuration du banc optique de type « precision Optical Device » permet de mesurer jusqu’à 16 paramètres de fluorescence. De conception « jet in air » l’Astrios peut atteindre une vitesse de tri de 70 000 évènements par seconde.
Les performances du système sont remarquables tant au niveau de la qualité de rendement et de pureté, de la vitesse d’acquisition et de tri, que de la capacité du traitement et du stockage des signaux.
Les signaux sont digitalisés à une fréquence de 100 MHz sur 32 bits (jusqu’à 100 000 évènements par seconde en analyse). En mode logarithmique, la gamme dynamique de mesure des signaux s’étend sur 5 décades (0,0001 à 10 volts). Il est possible d’activer simultanément 6 jets de tris, soit de trier six populations, selon des mode définis individuellement (single cell, pureté, enrichissement et mixte).
Le clonage single cell ultra précis (plaque 384 ou 96 puits fond conique et microvolume) se fait en tri vertical. Sort index en X et en Y.
Le module EQ permet une meilleure séparation des nanoparticules.
Le système est équipé d’un module de clonage.
Les supports de tubes pour l’échantillon sont multiples et il est possible de programmer son agitation.
La récupération des fractions triées dans des plaques multi-puits, sur des lames ou dans différents types de tubes s’effectue grâce à un bras robot. L’échantillon et les fractions collectées peuvent être maintenus dans un environnement où la température est régulée. Un jeu de buses de diamètre variable (50 à 200 µm) permet d’adapter le tri à la taille des évènements à analyser.
Le pilotage du trieur et l’acquisition des données sont réalisés avec le logiciel Summit 6.2.
Sourcesd’excitation 355 nm
Sourcesd’excitation 405 nm
Source d'excitation 488 nm
Source d’excitation 561 nm
Source d’excitation 640 nm
| Filtres supplémentaires |
Désignation standard Liste non exhaustive |
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| 405 / 10 BP | 400 - 410 | Alexa Fluor 350 |
| 513 / 26 BP | 500 - 526 | FITC, Alexa Fluor 488 |
| 530 / 10 BP | 525 - 535 | Rhodamine Green |
| 561 / 14 BP | 554 - 568 | Alexa Fluor 555 |
| 592 / 08 BP | 588 - 596 | Rhodamine Red |
| 642 / 10 BP | 637 - 647 | Alexa Fluor 633 |
d : Dichroïque – LP : Long Pass – SP : Short Pass - BP : Band Pass
Le laboratoire de culture met à votre disposition un PSM de classe II, un incubateur à CO2 et un évier. Le service possède un réfrigérateur/ congélateur, une centrifugeuse réfrigérée et une microfuge réfrigérée. Une machine à glace est accessible à proximité.
Ces équipements sont utilisables pour entreposer momentanément du matériel biologique ou autre. Ce matériel devra être clairement identifié.
Les stations d'analyse du service sont accessibles gratuitement sur réservation OpenIris.
Les logiciels disponibles, d'analyse des données de cytométrie, sont :
Summit Version 6
Kaluza Analysis 2.1
Le logiciel de déconvolution des phases du cycle cellulaire ou d'analyse de la prolifération : Modifit Version 3.3 est disponible sur l'ordinateur du cytomètre - analyseur LSRII. Contacter le service pour y avoir accès medecine-cisa-cytometrie@listes.sorbonne-universite.fr ou 01 40 01 13 68.
